目前对DNA或RNA的定量分析一般都需要首先将细胞中的蛋白除去,因为这些蛋白对DNA或RNA的某些分析会造成影响,在对RNA进行定量分析时一个更让人头疼的问题就是RNA酶(RNases),这些酶必须在细胞裂解后以最快的速度失活掉。否则,这些性质非常稳定的酶会成为RNA的“杀手”,它们会把RNA迅速“吃掉”,使我们的分析无法进行。
常规的将蛋白和RNases去掉的方法有通过化学试剂抽提或用一种基质将核酸吸附起来,这些方法都会使细胞裂解液在多个管子里转移,每转移一次虽然核酸会不断纯化,但是核酸也会不断损失。造成抽提步骤多而效果差。
这篇论文非常神奇的介绍了一个“单个管子”完成所有操作的方法,即所有核酸抽提的操作均在一个管子里完成。它使用一种称为GITC的化学物质,这种物质在常规的操作过程中也用到过,只不过这里使用的方法中,GITC可以具有足够低的浓度,从而可以不干扰反转录(RT)以及PCR这样的分子生物学反应。使用这种方法,甚至使单细胞的核酸分析成为可能。
参考文献:
Cristina Hartshorn,Aleksandra Anshelevich,Lawrence J Wangh.
Rapid, single-tube method for quantitative preparation and analysis of RNA and DNA in samples as small as one cell.
BMC Biotechnology 2005, 5:2 doi:10.1186/1472-6750-5-2
http://www.biomedcentral.com/1472-6750/5/2
doi:10.1186/1472-6750-5-2